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Dependiendo de la diferencia en la determinación de antígenos y anticuerpos, hay muchos modos de medición ELISA automáticos, como método directo, método indirecto, método de sándwich de doble anticuerpo (directo, indirecto), método de inhibición competitiva (directo, sándwich, etc.), método de captura, etc. En laboratorios clínicos, Los modos de medición de ELISA comúnmente utilizados incluyen método de sándwich de doble anticuerpo, método indirecto, método de sándwich de doble antígeno, método de inhibición competitiva y método de captura.

En la determinación de antígenos, el modo más comúnmente utilizado para la determinación de antígenos de macromoléculas proteicas es el método de sándwich de doble anticuerpo. Para moléculas pequeñas con un solo epítopo, se usa el método de inhibición competitiva; La determinación de anticuerpos generalmente usa el método indirecto, el método de sándwich de doble antígeno, el método de inhibición competitiva y el método de captura.

Método del bocadillo del anticuerpo 1. Double de puesto de trabajo de ELISA

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the Estación de trabajo ELISA uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Kit de prueba médica.

En la actualidad, en nuestro laboratorio clínico, la determinación de antígenos macromoleculares como HBsAg, alfa-fetoproteína (α-fetoproteína, αFP), antígeno prostático específico (PSA), marcadores de la serie CA, hCG y hormonas, etc. utilizan básicamente un método de un solo paso. En comparación con el método de dos pasos, el método de un paso es simple de operar, pero tiene sus deficiencias inherentes. Si no se maneja bien, los resultados del inmunoensayo de sándwich de doble anticuerpo serán falsos negativos o resultados cuantitativos bajos debido a la existencia del efecto gancho.

Prueba de la ley 2. Competitive del puesto de trabajo de ELISA

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The Estación de trabajo ELISA can only use the competitive inhibition method.

En este modo de ensayo, se necesita obtener una combinación de moléculas pequeñas y enzimas. La preparación de conjugados enzimáticos de molécula pequeña no es tan simple como la de los conjugados enzimáticos de anticuerpos, y su purificación también es bastante difícil. La diferencia de peso molecular entre la enzima unida a molécula pequeña y la enzima libre es pequeña, y es difícil de separar usando métodos generales de tamiz molecular. Por lo tanto, algunas personas intentan establecer un método ELISA de competencia de sándwich de doble anticuerpo para la determinación de moléculas pequeñas basadas en la síntesis de moléculas pequeñas di o multímero. Se ha mejorado la sensibilidad y especificidad de la determinación.

3. método indirecto de determinación de anticuerpos en la estación de trabajo ELISA

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Kit de prueba de anticuerpos. Antes de que sea difícil obtener antígenos de alta pureza y bien definidos, o cuando los antígenos son más complicados, generalmente se usa el método indirecto.

Hoy en día, los elementos de prueba clínica comúnmente utilizados del anticuerpo del virus de la hepatitis C (anti-VHC) son todos métodos indirectos, y el método indirecto se utiliza para detectar anticuerpos. Estrictamente hablando, solo se mide la clase IgG de anticuerpos, y las clases IgM e IgA no están involucradas. Esto se determina por el anticuerpo secundario marcado con enzima. En la actualidad, algunos kits específicos de detección de anticuerpos IgⅢ adoptan el método indirecto.

4. método doble del bocadillo del antígeno de puesto de trabajo de ELISA

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the Estación de trabajo ELISA has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. ley de la competencia del puesto de trabajo de ELISA

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the Estación de trabajo ELISA can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).